一、導(dǎo)言
近日，圣庭醫(yī)療與臺(tái)州學(xué)院附屬臺(tái)州中心醫(yī)院、臺(tái)州學(xué)院醫(yī)學(xué)院腫瘤研究所、臺(tái)州學(xué)院附屬臺(tái)州市醫(yī)院、臺(tái)州學(xué)院醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系的聯(lián)合研究發(fā)現(xiàn)，殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體2DL4（KIR2DL4）的敲低或過(guò)度表達(dá)可以分別抑制或促進(jìn)腎細(xì)胞癌（RCC）增殖。研究成果在中科院二區(qū)期刊《LIFE SCIENCES 》IF=6.780上發(fā)表，該研究結(jié)果有望為尋找潛在的RCC抗癌藥物提供理論基礎(chǔ)。
二、研究?jī)?nèi)容
本研究納入了TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)531例RCC的患者，使用了生物信息學(xué)分析、免疫組織化學(xué)、免疫印跡等技術(shù)對(duì)KIR2DL4是否由RCC表達(dá)及其在RCC進(jìn)展中的可能作用進(jìn)行了研究。
三、研究結(jié)果
NO.1 KIR2DL4在RCC中過(guò)量表達(dá)
在本研究中，利用GEPIA在線分析工具進(jìn)一步分析了不同等級(jí)RCC的KIR2DL4 mRNA表達(dá)水平，我們發(fā)現(xiàn)KIR2DL4的mRNA表達(dá)隨著RCC等級(jí)的增加而增加 (圖1a) 。
圖1 KIR2DL4在RCC細(xì)胞系中的蛋白表達(dá)情況。
GAPDH被用來(lái)作為內(nèi)參。
NO.2 敲低KIR2DL4的表達(dá)會(huì)降低Caki-1和769-P細(xì)胞的細(xì)胞活力和細(xì)胞系形成
通過(guò)轉(zhuǎn)染KIR2DL4-shRNA敲低KIR2DL4在Caki-1 和769-P細(xì)胞中的表達(dá)，并檢查其對(duì)它們?cè)鲋潮硇偷挠绊?。結(jié)果如圖2c和3c所示，KIR2DL4敲低可以明顯降低約35% Caki-1和769-P細(xì)胞的活力。在細(xì)胞周期檢測(cè)中，KIR2DL4敲低后約50%~70%的細(xì)胞 G1/G0停滯(圖2d和3d) ，這表明KIR2DL4敲低抑制了Caki-1和769-P細(xì)胞的細(xì)胞系形成。
圖2 KIR2DL4敲低可以減少Caki-1細(xì)胞的增殖。
圖3 KIR2DL4敲低可以抑制769-P細(xì)胞的增殖，
KIR2DL4敲低對(duì)細(xì)胞周期分布的影響。
NO.3 KIR2DL4可影響腫瘤相關(guān)途徑和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K) /AKT信號(hào)途徑
免疫印跡檢測(cè)顯示，在KIR2DL4高表達(dá)的Caki-1和769-P細(xì)胞中，磷酸化的AKT水平被上調(diào) (圖4c) ，而在KIR2DL4敲低的Caki-1細(xì)胞中，磷酸化的AKT水平在KIR2DL4被敲低后下降 (圖4d)，這些觀察表明，KIR2DL4可能通過(guò)PI3K/AKT途徑促進(jìn)RCC的進(jìn)展。
圖4 通過(guò)免疫印跡分析KIR2DL4過(guò)表達(dá)或敲低后的AKT磷酸化水平，GAPDH用作內(nèi)參。
四、小結(jié)與啟發(fā)
在過(guò)去的十年中，一些靶向藥物被美國(guó)食品和藥物管理局 (FDA)批準(zhǔn)用于RCC治療，包括索拉非尼、舒尼替尼、替米羅莫司和Ever-olimus[1-3]。在這個(gè)時(shí)間框架內(nèi)，RCC的中位總生存率有了明顯的改善。此外，隨著2015年FDA批準(zhǔn)nivolumab用于晚期RCC患者，免疫療法也在重新興起[4-5]?？偟膩?lái)說(shuō)，RCC的免疫療法正在獲得研究興趣。
在本研究中，我們的研究結(jié)果表明KIR2DL4在RCC細(xì)胞中過(guò)度表達(dá)，而KIR2DL4的敲低或過(guò)度表達(dá)可以分別抑制或促進(jìn)RCC細(xì)胞增殖。此外，過(guò)表達(dá)KIR2DL4的Caki-1和769-P細(xì)胞的pAKT水平更高，這表明KIR2DL4可能通過(guò)PI3K/AKT信號(hào)通路促進(jìn)RCC的進(jìn)展?；谠撗芯拷Y(jié)果，有望為尋找潛在的RCC抗癌候選藥物提供理論基礎(chǔ)。
參考文獻(xiàn)
[1] B. Escudier, et al., Sorafenib in advanced clear-cell renal-cell carcinoma, N. Engl. J. Med. 356 (2) (2007) 125–134.
[2] S. N′egrier, et al., Temsirolimus and bevacizumab, or sunitinib, or interferon alfa and bevacizumab for patients with advanced renal cell carcinoma (TORAVA): a randomised phase 2 trial, Lancet Oncol 12 (7) (2011) 673–680.
[3] S. Grover, J.C. Singh, N.S. Kekre, Temsirolimus, interferon alfa or both in advanced renal-cell carcinoma: one plus one does not always equal two, Indian J. Urol. 23 (3) (2007) 332–333.
[4] R.J. Motzer, et al., Efficacy of everolimus in advanced renal cell carcinoma: a double-blind, randomised, placebo-controlled phase III trial, Lancet 372 (9637) (2008) 449–456.
[5] D.M. Gill, et al., Overview of current and future first-line systemic therapy for metastatic clear cell renal cell carcinoma, Curr. Treat. Options in Oncol. 19 (1) (2018) 6.